Tudo sobre seladores de microplacas

• FILMES ou FOLHAS de alumínio:

   - Esta opção de vedação é semelhante aos filmes adesivos de poliéster. Por serem compostas por alumínio são ideais para serem utilizadas em etapas sensíveis a luz. Além de permitirem a perfuração e fácil acesso aos poços individuais.

• TAMPAS EM TIRAS:

As tampas em tiras são conectadas, o que permite a vedação dos poços individualmente, sendo eles em microplacas ou microtubos em tiras. Existem variações dessas tiras em relação ao seu formato e vedação.

• Tampas em tiras tipo Domed:

- Ao serem encaixadas em tiras de microtubos, proporcionam uma vedação firme, evitando a evaporação e assegurando a transferência térmica quando pressionadas pela tampa do termociclador.

• Tampas em tiras tipo flat (planas/chatas):

- As borrachas de vedação são feitas de silicone e também são ideais para minimizar a evaporação das amostras submetidas a uma ampla faixa de temperatura. Elas possuem o diferencial de serem reutilizáveis, quando é seguido um protocolo de lavagem com água sanitária e enxágue com etanol, além de serem autoclaváveis.

Agora que exploramos os tipos de seladores, vamos aprofundar nosso entendimento sobre sua importância prática, especialmente na garantia da estabilidade térmica frente a variações de temperatura. Essas variações podem ocorrer desde o armazenamento a -80 °C até etapas de incubação em temperaturas elevadas, chegando a 100 °C.

ARMAZENAMENTO EM ALTAS TEMPERATURAS:

Sabemos que a PCR, é uma reação composta pelos ciclos de desnaturação, anelamento e extensão, percebemos que essas etapas variam de acordo com as temperaturas associadas. No primeiro ciclo, a temperatura atinge cerca de 96°C, desnaturando a dupla hélice do DNA e resultando em duas fitas simples. O anelamento, geralmente a 55°C (podendo atingir 65°C), permite que os primers se liguem às sequências complementares no DNA molde de fita simples. A última etapa, por volta de 72°C, leva à síntese de novas fitas de DNA pela Taq polimerase. Essas etapas se repetem de 20 a 40 ciclos, ampliando exponencialmente a quantidade de DNA a ser analisada.

Com o aumento da temperatura, torna-se crucial a necessidade de uma vedação eficaz para evitar a evaporação das amostras. Entre as opções de seladores apresentados, todos oferecem proteção às amostras, adaptando-se às diferentes etapas da análise.

ARMAZENAMENTO EM TEMPERATURAS BAIXAS:

O armazenamento de amostras ocorre em uma variedade de temperaturas baixas, seja a curto prazo em temperatura ambiente ou refrigeradas (aproximadamente 4 °C), ou em congeladores (aproximadamente -20 °C). Para armazenamento de longo prazo em temperaturas ultrabaixas (-80 °C), destaca-se o uso de vedação com filme térmico como a opção mais eficaz.

Dessa forma, a escolha do selador adequado é essencial para garantir estabilidade térmica durante as diversas etapas da análise, oferecendo proteção contra evaporação em temperaturas elevadas e assegurando um armazenamento eficaz em temperaturas mais baixas.

ARMAZENAMENTO DE AMOSTRAS SENSÍVEIS À LUZ:

Na qPCR cada ciclo é monitorado óptica e quantitativamente, desta forma, além da vedação térmica também é essencial o uso de filmes e tampas ultra transparentes que não interfiram na transmissão de luz. Essa vedação não só contribui para a eficácia da detecção durante a reação, como também protege as amostras sensíveis à luz durante o armazenamento.

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