ELETROFORESE: da Teoria à Prática. Encontre os melhores equipamentos aqui na Dsyslab!

A eletroforese é uma técnica analítica amplamente utilizada na Biologia Molecular para separar e purificar macromoléculas, especialmente proteínas e ácidos nucleicos. Esse método baseia-se na diferenciação das moléculas de acordo com sua carga elétrica e peso molecular. 

Quando submetidas a um campo elétrico em uma matriz, as macromoléculas migram em direção ao polo positivo ou negativo, dependendo de sua carga. O DNA, por exemplo, possui carga negativa devido à presença de grupos fosfato em sua estrutura. Portanto, quando exposto a uma corrente elétrica, as moléculas de DNA migram em direção ao polo positivo.  

A velocidade da migração é influenciada pelo peso molecular da molécula, sendo que moléculas mais leves migram mais rapidamente do que as mais pesadas. Esse fenômeno resulta na formação de bandas distintas, proporcionando a visualização do conteúdo da amostra. Essas bandas características são essenciais para a análise e interpretação dos resultados da eletroforese. 

PASSO A PASSO 

1. Escolha da Matriz: 

• Selecione a matriz apropriada para a corrida da amostra. O gel de agarose é preferencial para separar grandes moléculas de DNA, enquanto a poliacrilamida é mais adequada para moléculas menores. Varie as concentrações desses géis conforme necessário para obter uma resolução ideal das moléculas.

2. Escola da Cuba:

• Cubas verticais são frequentemente utilizadas em ensaios com géis de poliacrilamida para visualização de partículas menores. A cuba de eletroforese horizontal muito utilizada com os géis de agarose, principalmente para separação de fragmentos de DNA.

3. Escolha da Fonte: 

• Opte por uma fonte adequada, responsável por gerar o campo elétrico essencial para movimentar as moléculas através do gel.

4. Preparação do Gel:

• Introduza o gel em uma solução tampão específica para eletroforese. Essa solução oferece condições ideais para a passagem da corrente elétrica e a manutenção do pH.

5. Carregamento das Amostras: 

• Pipete as amostras nos pequenos poços previamente formados no gel utilizando um pente. Garanta que as amostras sejam carregadas de maneira precisa para resultados confiáveis.

6. Execução da Eletroforese:

• A cuba e a fonte de eletroforese são acionadas para exercer uma voltagem, corrente e potência constantes. Esses fatores são cruciais para a migração das moléculas ao longo do gel. 

7. Visualização das Bandas::

• As bandas formadas durante a eletroforese são visualizadas sob luz ultravioleta ou LED, normalmente por meio de um equipamento chamado transiluminador, para tornar as bandas visíveis e permitir a análise dos resultados.

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Fontes: 

4-ELETROFORESE HORIZONTAL.pdf - Google Drive 

Eletroforese em gel (vídeo) | Biotecnologia | Khan Academy 

Eletroforese (ufg.br) 

Princípios da Técnica de Eletroforese (kasvi.com.br)